Предисловие
Достижения современной нейробиологии фокусируются прежде всего на решениях наиважнейших проблем человечества - улучшении качества диагностики и лечения ней-роонкологических, нервных и психических заболеваний.
Одним из наиболее продуктивных разделов нейробиологии на рубеже ХХ - ХХI веков, несомненно, стала нейроиммунохимия - научная дисциплина, в сферу исследова-ний которой вошли исследования спектра нейроспецифических антигенов и антител к ним.
Именно этому классу биологически активных молекул, характеризующихся высо-кой специфичностью для клеток нервной ткани, отводится значительная роль в биохимии и молекулярной биологии специфических интегративных процессов нервной системы (па-мять, мышление, внимание, эмоции и т.п.).
Оценивая составляющие прогресса нейробиологии, следует признать основополо-гающее значение комплекса аналитических и препаративных методов современной имму-нохимии, без которых невозможна реализация тех смелых научных идей, которые в после-дующем и сформировали новое научное направление, известное ныне как нейроиммуно-химия.
Настоящая монография посвящена детальному анализу результатов исследования спектра нейроспецифических антигенов, представленных в мировой литературе, а также оценке методических подходов к идентификации, биохимическому, иммунохимическому изучению нейроспецифических белков, их прикладному клиническому значению за более чем 30-летний период.
Кроме того, в монографии приводятся и обсуждаются результаты собственных ис-следований сотрудников лаборатории иммунохимии ГНЦССП им. В.П. Сербского, выпол-ненные индивидуально и в соавторстве с ведущими отечественными и зарубежными спе-циалистами, в области нейробиологии, невропатологии, психиатрии и других клинических специальностей.
Значительное место в книге уделяется анализу перспектив, клинико-лабораторного применения систем анализа НСБ и анти-НСБ антител в целях диагностики и контроля эф-фективности проводимой терапии заболеваний, сопровождающихся нарушением функций ГЭБ.
Одна из важных задач настоящей книги - предоставить в руки нейробиологов адаптированное методическое пособие, которое облегчило бы им применение методов иммунохимического анализа в решении сугубо специальных проблем молекулярной био-логии.
Настоящая монография будет очень полезна для широкого круга исследователей - иммунологов, биохимиков, нейрогенетиков, клиницистов, чей круг научных интересов связан с изучением наиболее сложных вопросов современной нейробиологии.
Академик РАН Р.В. Петров
Содержание
Иммунохимический анализ нейроспецифических белков
Введение.
1. Цитоплазматические нейроспецифические белки
1.1 Антигены группы S100 (проф. В.П. Чехонин, к.х.н. Ю.А. Жирков)
1.1.1 Идентификация белка S100
1.1.2 Очистка и физико-химические свойства S100
1.1.3 Клеточная локализация S100 и его специфичность для нервной ткани
1.1.4 S100 в филогенезе и онтогенезе
1.1.5 Функции S100.
1.1.6 Анализ перспектив клинического применения S100
1.2 Нейроспецифическая енолаза, или антиген 14 3 2. (проф. В.П. Чехонин, к.м.н. И.А. Рябухин, к.м.н. О.М. Антонова, проф. Т.Б. Дмитриева, к.м.н. И.А. Беляева)
1.2.1 Идентификация, очистка, физико-химические свойства антигена 14 3 2 и методы его определе-ния.
1.2.2 Исследование тканевого распределения, клеточной и субклеточной локализации NSE и NNE
1.2.3 Мозговые формы енолазы в онтогенезе.
1.2.4 Клиническое значение NSE.
1.3 Альфа-2-гликопротеин (?2GP). (проф. В.П. Чехонин, к.б.н. Е.А. Коротеева, к.м.н. И.А. Рябухин, д.м.н. В.В. Белопасов, к.м.н. Р.Г. Биктимиров, А.В.Макаров, к.м.н. И.С Пре-ображенская, проф. Н.Н. Володин, проф. Т.Б. Дмитриева)
1.3.1 Идентификация, очистка и физико-химические свойства 2GP.
1.3.2 Клеточная и субклеточная локализация ?2GP.
1.3.3. ? 2GP в филогенезе и онтогенезе.
1.3.4 Клинические исследования ?2GP.
1.4 Глиофибриллярный кислый антиген (GFAP). (проф. В.П. Чехонин, к.м.н. О.И. Гурина, к.б.н. И.И. Ше-пелева, д.м.н. В.В. Белопасов, к.м.н. Л.А. Тимофеева, проф. Н.Н. Володин)
1.4.1 Идентификация, очистка, физико-химические свойства и молекулярно-биологическая характе-ристика GFAP.
1.4.2 GFAP при филогенезе и онтогенезе. Тканевая и клеточная локализация.
1.4.3 GFAP при реактивном астроглиозе.
1.4.4 GFAP в клинических исследованиях
1.5 Альфа 1- и альфа 2 глобулины мозга (?1BG и ?2BG). (проф. В.П. Чехонин, д.м.н. С.Г. Морозов, к.б.н. Е.А. Коротеева, к.м.н. С.О. Рогаткин, к.м.н. Т.А. Павлова, к.м.н. И.А. Беляева, к.м.н. Р.Г. Биктимиров, к.м.н. Р.Ц. Лиджиева, д.м.н. С.А. Гроппа, к.м.н. Е.Я. Караганова, к.м.н. Л.Е. Бреусенко)
1.5.1 Иммунохимическое изучение нейроспецифических водорастворимых антигенов в нативном экстракте мозга и новые препаративные подходы к их идентификации.
1.5.2 Получение антисывороток и разработка иммунодиффузионных тест-систем для ?1BG и ?2BG.
1.5.3 Клеточная локализация, состав и физико-химические свойства ?1BG и ?2BG.
1.5.4 Иммунохимический анализ ?1BG и ?2BG в биологических жидкостях и экстрактах из нормаль-ных тканей человека и животных.
1.5.5 Иммуноферментный анализ ?1BG и ?2BG в экстрактах из ткани мозга и в биологических жид-костях больных с поражением центральной и периферической нервной системы.
1.6 Цитоплазматические антигены мозга человека, специфические для нервно-психических заболеваний. (проф. В.П. Чехонин, проф. Т.Б. Дмитриева, проф. З.И. Кекелидзе)
2. Нейрональные молекулы клеточной адгезии. (проф. В.П. Чехонин, к.б.н. И.И. Шепелева, к.х.н. Ю.А. Жирков, к.м.н. И.А. Рябухин)
2.1. NCAM.
2.2. Белок L1.
2.3. MAG.
2.4. Структуры молекул клеточной адгезии.
2.5. Перспективы применения молекул клеточной адгезии в клинико-диагностических целях.
3. Нейроспецифические белки при экспериментальном моделировании прорыва гематоэнцефалического барьера. (проф. В.П. Чехонин, к.м.н. И.А. Рябухин, к.м.н. О.И. Гурина, к.м.н. Р.Ц. Лиджиева, д.м.н. В.В.Рынсков )
3.1. Иммуноферментный анализ GFAP и ?2GP в оценке проницаемости ГЭБ при остром ? облучении.
3.2. Иммуноферментный анализ GFAP и ?2GP в оценке проницаемости ГЭБ при острой экспериментальной нейролепсии крыс, вызванной галоперидолом.
3.3. Иммуноферментная регистрация GFAP и ?2GP в оценке проницаемости ГЭБ при острой экспериментальной ишемии головного мозга.
3.4. Исследование проницаемости ГЭБ у новорожденных крысят в условиях индуцированных гипертермических судорог.
3.5. Экспериментальное изучение патологической роли ААТ к НСБ.
4. Экстракорпоральная иммуноадсорбция анти-?1BG, ?2BG, GFAP и ?2GP антител (от эксперимента - к клиническокому применению) (проф. В.П. Чехонин, проф. Ю.А. Лейкин, к.х.н. Т.А. Черкасова, к.м.н. И.А. Ря-бухин, проф. В.М. Морковкин, проф. Г.В. Морозов, проф. З.И. Кекелидзе)
5. Использование антител к нейроспецифическим белкам для направленного транс-порта психотропных средств через гематоэнцефалический барьер. (проф. В.П. Че-хонин, к.х.н. Ю.А. Жирков, д.х.н. А.В. Кабанов, к.х.н. В.Ю. Алахов, проф. Т.Б. Дмитриева)
6. Приложение
6.1 Методы иммунохимического анализа. (Под общей редакцией проф. В.П. Чехонина и к.х.н. Ю.А. Жиркова)
6.1.1 Получение антисывороток и их анализ.
6.1.2 Процедуры иммунохимического анализа
6.1.3 Твердофазный иммуноферментный анализ.
6.2 Химическое модифицирование антител и их фрагментов.
6.3 Исследование трансбарьерного транспорта модифицированных белков.
6.4 Иммунофлюоресцентный анализ.
6.5 Получение моноклональных антител к глиофибриллярному кислому антигену (GFAP)
6.6 Антитела, получаемые генно-инженерным путем.1
6.7 Искусственная гидрофобизация F(ab)2- и F(ab)-фрагментов антител.
6.8 Иодирование препаратов антител и их F(ab)2- и F(ab)-фрагментов.
6.9 Проверка иммунохимической активности у модифицированных F(ab)2- и F(ab)-фрагментов антител.
6.10 Исследование распределения меченных 125I гидрофобизованных F(ab)2- и F(ab)-фрагментов антител в организме крыс после парентерального введения.
6.11 Экспериментальное моделирование прорыва гематоэнцефалического барьера.
6.12 МЕТОДЫ ОЧИСТКИ БЕЛКОВ
6.12.1 Высаливание и осаждение ацетоном.
6.12.2 Ионообменная хроматография.
6.12.3 Гель-фильтрация.
6.12.4 Гидрофобная хроматография.
6.12.5 Изохроматофокусирование.
6.13 Методы количественного определения общего белка
6.14 Диск-электрофорез в полиакриламидном геле.
6.15 Процедуры очистки некоторых нейроспецифических белков.
6.16 Сводные таблицы результатов клинико-лабораторного иммунохимического анализа нейроспецифических белков и их аутоантител.
Список литературы
Москва "Медицина" 1999
